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GracchusBabeuf a écrit : 16 mai 2018, 06:36

Wald a écrit : 16 mai 2018, 00:42

Une EPO indétectable est très facile à produire à l’heure actuelle. Pour la détecter, il faut qu’elle soit différente de celle produite par l’homme à cause :
- de Tag que les industries pharmaceutiques rajoutent pour permettre une meilleure purification
- du système de production (bactérie, insecte) qui ne fait pas les mêmes modifications post-traductionnelles
- des modifications de séquence en acides aminés pour augmenter sa stabilité ou sa biodisponibilité

Mais tu peux facilement produire de l’EPO, 100% identique à celle que chaque individu produit.

Petit protocole :
1. Tu clones le gène de l’EPO sans aucune modification de sa séquence en acides nucléiques dans un lentivirus sous le contrôle d’un promoteur CMV.
2. Tu produits le vecteur lentiviral dans des cellules 293T
Ces deux étapes peuvent être sous-traités auprès de société de biotechnologie (dans les 5k€ à mon avis)
3. Tu transduits avec le vecteur lentiviral des cellules cancéreuses humaines
4. Tu purifies l’EPO sécrétée par les cellules. C’est l’étape qui nécessite le plus de mise au point. Je crois (cela fait longtemps que je ne produits plus de protéine recombinante, qu’il y a des tags qui sont faciles à éliminer juste après action d’une protease), mais sinon tu peux la purifier non tagguée avec les bonnes vieilles méthodes de biochimie (bon il faut un HPLC).

Résultat: une EPO indétectable

Cette production semble en effet envisageable à petite échelle. Une méthode pour pas balader de tag doit bien exister et ça se met en œuvre facilement. Après il existera forcément des différences avec une hormone humaines (notamment dans les differences post traductionelle même dans des vecteurs plus proches de nos cellules) mais sûrement presque impossible à détecter surtout si elles varient de l'une à l'autre.
À titre d'exemple dans le cadre d'un projet au cours de mes études de pharmacie on avait produit de l'hormone de croissance humaine. Juste avec 20L dans des erlenmayer on avait des résultats de prods correcte en sachant qu'on avait 3 semaines.
Mais c'est la une analyse très biochimiste de la question ( à mon humble avis).
Sans vouloir respecter les règles qualitative d'un médicament l'étape 2 qui est la purification et la formulation me semble autrement compliqué que produire dans un vecteur connu. Il y a plusieurs challenge.
Faire une hormone bien replié, qui ne s'altère pas dans le process de purification.
Trouver la formulation adéquate pour lui garantir un minimum de stabilité le temps au moins de la purifier et l'injecter.
Ne pas entraîner de réaction chez le sujet à qui on l'administre (par exemple des lyses cellulaires parceque ce serait ballo de perdre 10 pts de ht à l'injection).
Je ne dit pas que cela n'a pas exister mais que chacun mette au point sa petite EPO dans son coin j'y crois moyen. Meme si comme tu le.dit à produire c'est facile.
Après si un gros groupe type une équipe d'un pays pour des JO (par exemple à domicile ) à développer une technique, cloner le vecteur de prod et la méthodo peut se faire chez soit ou presque et c'est là le problème.

GATO a écrit : 16 mai 2018, 14:28

biquet a écrit : 16 mai 2018, 10:35

Oui mais je ne suis pas certain que Belda ait eu le temps matériel de mettre à mon "chouchou" tout ce qu'il a mis à Valverde et ses copains de Kelme (entres autres). Je n'ai pas trop d'illusion sur Quintana (pas plus que sur les autres cadors, d'ailleurs) , mais je ne crois pas qu'on lui ait appliqué le programme Fuentes pendant plusieurs années.

Boyacá es para vivirla
le plus prometteur Robinson Lopez positif EPO
qui aide cette equipe ?
qui s occupait de cette equipe ?

damienleflahute a écrit : 17 mai 2018, 14:37 C'est quoi cette histoire de réprimande pour Kevin Ista? (voir page d'accueil).
1ère fois que j'entends ça.

Bradounet_ a écrit : 16 mai 2018, 14:04 Wald bosse dans la recherche en immunologie si je ne me trompe pas.

Wald a écrit : 18 mai 2018, 02:48

Bradounet_ a écrit : 16 mai 2018, 14:04 Wald bosse dans la recherche en immunologie si je ne me trompe pas.

Non je suis plus chercheur en biologie moléculaire dans le domaine du cancer.

Pour revenir, aux commentaires du nouveau forumeur GracchusBabeuf (bienvenue à toi) et de Wombat, voui dans mon protocole le verrou à lever, pour reprendre la formulation des instances européennes d’évaluation des projets de recherche, est la purification du transgène. Cela dit par expérience, en recherche moins contraignante que dans le domaine pharmaceutique, tu peux arriver à produire de cette façon des molécules biologiquement actives. Je crains que le produit fournit dans mon protocole ne soit pas moins pourri que ce certains se sont injectés par le passé. Quant aux modifications post-traductionelles, dans une lignée erythropoiétique comme les K562, je pense qu’elle serait presques parfaites pour l’EPO, mais après de la biblio, on pourrait trouver la cellule idéale pour la production d’EPO.

Pour le sucre, tu peux produire ainsi n’importe quelle protéine d’origune humaine dont notamment l’hormone de croissance. La seule façon de les détecter serait en effet de suivre leur conséquence via un passeport biologique. Par contre, les substances chimiques synthétiques ne rentrent pas dans ce cadre.

Désolé pour mes délais de réponse, mais je n’ai guère le temps actuellement.

Wald a écrit : 18 mai 2018, 02:48

Bradounet_ a écrit : 16 mai 2018, 14:04 Wald bosse dans la recherche en immunologie si je ne me trompe pas.

Non je suis plus chercheur en biologie moléculaire dans le domaine du cancer.

Pour revenir, aux commentaires du nouveau forumeur GracchusBabeuf (bienvenue à toi) et de Wombat, voui dans mon protocole le verrou à lever, pour reprendre la formulation des instances européennes d’évaluation des projets de recherche, est la purification du transgène. Cela dit par expérience, en recherche moins contraignante que dans le domaine pharmaceutique, tu peux arriver à produire de cette façon des molécules biologiquement actives. Je crains que le produit fournit dans mon protocole ne soit pas moins pourri que ce certains se sont injectés par le passé. Quant aux modifications post-traductionelles, dans une lignée erythropoiétique comme les K562, je pense qu’elle serait presques parfaites pour l’EPO, mais après de la biblio, on pourrait trouver la cellule idéale pour la production d’EPO.

Pour le sucre, tu peux produire ainsi n’importe quelle protéine d’origune humaine dont notamment l’hormone de croissance. La seule façon de les détecter serait en effet de suivre leur conséquence via un passeport biologique. Par contre, les substances chimiques synthétiques ne rentrent pas dans ce cadre.

Désolé pour mes délais de réponse, mais je n’ai guère le temps actuellement.

Wald a écrit : 19 mai 2018, 00:00 Pour le côté pharmacologique instable de l’EPO, au lieu de s’injecter de l’EPO produite par des cellules humaines, la solution pourrait être de s’injecter le vecteur lentiviral codant pour l’EPO : dopage génétique.

Je ne suis pas un expert dans ce domaine, mais je n’y crois pas trop. Ils envisagent et même mettent en œuvre ce genre de stratégie (pas avec des lentivirus car ils s’intègrent dans l’ADN génomique) pour les maladies génétiques, mais je crois que c’est assez difficile à mettre en place.